原位杂交电话

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台。

倒置平板，于37℃培养至划线的***菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。1977年，荧光标记的被应用于识别特异性DNA—RNA杂交II。 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果 裂解***，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。1molPBS洗三次，2×***洗10min，滴加预杂交液室温孵育1h。

探针的标记物可以是性同位素，也可以是非性生物素和半抗原等，性同位素中，3H和35S为常用，3H标记的探针半衰期长，成像分辨率高，便于***，缺点是能量低，35S标记探针活性较高，影像分辨率也较好，而32P能量过高，致使产生的影像模糊，不利于确定杂交位点。吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。***检测定义***检测：指通过***芯片等方法对被测者细胞中的DNA分子进行检测，并分析被检测者所含致病***、***易******等情况的一种技术。

切片及细胞标本的制备

载玻片的处理　因为原位杂交一般在载玻片上进行，所以载玻片必须保持清洁且不能有任何核酸酶的污染。收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后换成，在-20C保存，待用（两天和两天以上的胚胎需要用处理，去除色素。一般载玻片可先经洗衣粉浸泡过夜，用流水冲洗、酸中浸泡4～8h，再用流水冲洗，双蒸水洗2～3次。在160℃烤箱中烘烤2～4h。亦可经15磅高压灭菌20min处理，可将载玻片上的核酸酶消除。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。此方法有很高的敏***和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。

显色以下各步均在室温下进行。

（1）缓冲液I洗1min。

（2）用含2%正常羊和0.3％TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。

（3）用含1％正常羊和0.3％TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。

（4）将稀释液滴加在切片上，封口膜覆盖，湿盒内4℃孵育过夜。

（5）缓冲液I洗10min。

（6）缓冲液Ⅱ洗10min。

（7）加显色液，封口膜覆盖，避光室温孵育2～20h，随时镜检，当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。

显色液临用前配，其配方为：①NBT 45μl；②X-Phospllate液 35μl；③左旋咪唑 2.4mg；④缓冲液Ⅱ 加至10ml。

（8）常规脱水、透明、封固。

结果：杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。